EHA105

农杆菌感受态细胞
目录号 ：
GV3101(红盖)
EHA105(白盖)
LBA4404(黄盖)
保存条件 ：-80℃ ，干冰运输
产品规格
10×100μl
产品说明
High5 系列农杆菌感受态细胞是农杆菌菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞 ，可用于
DNA 的热击转化 ，具有利福平/链霉素抗性 ，适用于水稻 、烟草等植物的转基因操作 ，
经 pCAMBIA1302 质粒检测转化效率高达 10 3  cfu/μg（详见图） 。
操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化 。
2. 每 100μl 感受态加 1ug 质粒 DNA 混匀 ，依次于冰上静置 10 分钟 、液氮 5 分钟 、37℃ 5
分钟 、冰浴 5 分钟 。
3. 加入 700μl 无抗生素的 YEP 或 LB 液体培养基 ，于 28℃振荡培养 2~3 小时 。
4. 5000rpm 离心一分钟收集菌体 ，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应
抗生素的 YEP 或 LB 平板上 ，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天 。
5.根据实验需求 ，取适量已转化的感受态细胞 ，加到含相应抗生素的 YEP 或 LB 固体琼脂
培养基上 ，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开 ，将平板置于 28℃直至液体被吸收 ，倒置
培养 ，28℃培养 2-3 天 。
注意事项
1.感受态细胞一定要用干冰运输 。感受态细胞应在-80℃下保存 ，不可反复冻融和放置时
间过长 ，以免降低感受态细胞的转化效率 。
2.转化所有步骤均在无菌条件下操作 。
3.感受态细胞最好在冰上融化 。
4. 混入质粒时应轻柔操作 。
5. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量 。