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10*100ul |
￥198元 |
目录号 ：BL0810
保存条件 ：-80℃ ，干冰运输 ，避免反复冻融
产品规格 ：10×100ul(蓝色盖子)
产品介绍
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本产品是大肠杆菌BL21(DE3) pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞 ，可用于DNA的热击转化 。该菌株携带pLysS质粒 ，具有氯霉素抗性 ，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白 。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因 ，能够降低目的基因的背景表达水平 ，但不干扰目的蛋白的表达 。使用pUC19质粒检测 ，转化效率可达10^7 。
操作方法
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1．取感受态细胞置于冰浴中 。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl ，可以根据实际情况分装使用 。以下实验以50 μl感受态细胞为例 。
2．待感受态细胞融化后 ，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA ，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和） ，用移液器轻轻吹打混匀 ，冰浴30分钟 。
3．42℃热击45秒 ，迅速将离心管转移到冰浴中 ，冰上静置2-3分钟 。
4．向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素） ，混匀后置于37℃摇床 ，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏 。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞 ，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上 ，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收 ，倒置培养 ，37℃培养12-16小时 。
注意事项:
1）涂布用量可根据具体实验调整 。若转化的DNA总量较多 ，可取少量转化产物涂布平板 ；若转化的DNA总量较少 ，可取200-300 μl转化产物涂布平板 。若预计的克隆数较少 ，可通过离心（4,000 rpm ，2分钟）后吸除部分培养液 ，悬浮菌体后将其涂布于平板中 。
2）新制备的固体培养基不易涂干 ，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养 。
3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存 ，如果次日的转化菌落数过少 ，可以将剩下的菌液再涂布新培养 基进行培养 。